Factaran eadar-theachd ann an ath-bheachdan PCR

Rè ath-bhualadh PCR, tha e gu tric air cuid de fheartan eadarter a 'toirt a-steach.
Mar thoradh air an cugallachd gu math àrd, thathas den bheachd gur e truailleadh mar aon de na feartan as cudromaiche a tha a 'toirt buaidh air toraidhean PCR agus faodaidh iad toraidhean meallta a thoirt gu buil.
A cheart cho càineadh tha na diofar stòran a tha a 'leantainn gu toraidhean neo-mhothachail. Ma tha aon phàirt de na pàirtean riatanach no barrachd de mheasgachadh PCR no an ath-bhualadh leudaichte fhèin air a thoirmeasg no a 'cur bacadh air, faodar an assy diagnostic a bharrantachadh. Faodaidh seo leantainn gu èifeachdas nas lugha agus eadhon toraidhean àicheil meallta.
A bharrachd air casg, call an ionracas searbhagach ncccigeach ncccigeach a bhith a 'tachairt air sgàth suidheachadh luingearachd agus / no stòraidh ro dheasachadh sampaill. Gu sònraichte, dh 'fhaodadh gum faod teòthachd àrd no stòradh neo-iomchaidh milleadh a dhèanamh air ceallan agus searbhan ncccleic. Tha rèiteachadh cealla agus tais-staraid agus àrdachadh paraffin ainmeil air adhbharan briseadh DNA agus duilgheadas leantainneach (faic figearan 1 agus 2). Anns na cùisean sin, cha chuidich eadhon iomallachd agus putadh as fheàrr.

Figear 1 | Buaidh immobilization air dna ionracas
Sheall elerophoromoresis Anagaromanis gu robh càileachd an DNA iomallach bho earrannan paraffin de aucopies eadar-dhealaichte. Bha DNA de dhiofar fhaid cuibheasach eadar-dhealaichte an làthair anns na h-earrannan a rèir an dòigh rèiteachaidh. Cha deach DNA a ghleidheadh ​​ach nuair a tha iad stèidhichte ann an sampaill reòta dùthchasach agus ann am buffered Nutrial FOREIN. Thàinig cleachdadh de bhative Boin Fixic Sadaic no neo-fhreagarrach, foirmeil neo-phreasaichte mar thoradh air call mòr DNA. Tha am bloigh a tha air fhàgail criomagach.
Air an taobh chlì, thèid fad criomagan a chuir an cèill ann am paidhrichean Kilocase (KBP)

Figear 2 | Call ionracas de thargaidean searbhag niùclasach
(a) beàrn 3'-5 'air an dà chompanaidh thig fois anns an DNA targaid. Bidh synthesis de DNA fhathast a 'tachairt air a' chriomag bheag. Ach, ma tha làrach batar primale a dhìth air criomag DNA, cha bhith ach leudachadh loidhne-loidhne a 'tachairt. Anns a 'chùis as fàbharach, faodaidh na criomagan ath-thòiseachadh a chèile, ach bidh na toradh toraidh beag agus gu h-ìosal ìrean lorgaidh.
(b) call bunaitean, mar as trice air sgàth caochlaideachd agus cruthachadh dimer a 'leantainn gu lùghdachadh anns an àireamh de dhaoine agus lùghdachadh ann an TM. Rè na h-ìre blàthachadh fada, leaghaidh na prìomhairean air falbh bhon DNA am matrix agus nach bi e a 'leaghadh eadhon fo chumhachan nas strì.
(c) ri taobh Basan THYMINHOINED FOIRM FOIRM TT 10E.
Tha duilgheadas cumanta eile a bhios gu tric a 'tachairt ann an Diagnostics Malecular an sgaoileadh nas lugha na a' sgaoileadh deidean nccccigeach targaid an coimeas ri toirt a-mach a-mach phenol-chulothachaidh. Ann an cùisean fìor, faodaidh seo a bhith co-cheangailte ri negaitichean meallta. Faodar mòran ùine a shàbhaladh le bhith a 'goil lysis no cladhach eireachdail de sprùilleach cealla, ach bidh an dòigh seo gu tric a' leantainn gu cugallachd PCR ìosal air sgàth sgaoileadh searbhagach niuclasach.

Cuir casg air gnìomhachd Polymerase anns a 'leudachadh

San fharsaingeachd, thathas a 'cleachdadh casg air bun-bheachd Contral airson cunntas a thoirt air a h-uile feart a tha a' leantainn gu toraidhean PCR SubPoptic. Ann an dòigh teann bith-cheimigeach, tha casg air cuingealachadh ri gnìomhachd an enzyme, ie, bidh e a 'lughdachadh atharrachadh no a' co-obrachadh (me, MG2 + airson taq Dna Polymere).
Faodaidh co-phàirtean san t-sampall no diofar bhufairean a bhith a 'cur bacadh air an enzyme no a' dol an sàs ann an òrdughan polr no meallta.
Ach, tha mòran eadar-obrachadh eadar pàirtean ath-bhualadh agus na sreangan niùclasach nigheadaireachd cuideachd air an comharrachadh mar 'barraichean pcr'. Cho luath 's a thèid dragh a chuir air ionracas a' chill agus tha acid niùclasach a leigeil ma sgaoil, faodaidh e eadar-obrachadh eadar an sampall agus am fuasgladh mun cuairt air a bhith a 'tachairt. Mar eisimpleir, faodaidh Scavengers 'DNA aon-chonnail no casg a chuir air iomallachd agus putadh le bhith a' lughdachadh an àireamh de thars a tha a 'ruighinn an t-soitheach ath-bhualadh PCR a-thìde.
San fharsaingeachd, tha beachdan PCR an làthair anns a 'mhòr-chuid de dhleastanasan is chliùiteach clionaigeach (hemoglins agus Heparinens, Glycogen) agus pàirtean, meatailtean trom)

Gheibhear bacadh nas so-chruthach ann am bacteria agus ceallan Eekaryotic, gun a bhith a 'toirt air DNA a' ceangal ri mac-ciùil MacRolesces agus plastics. Is e geur nan acaids nucicic ann an no às deidh às-tharraing an dòigh as fheàrr leotha airson bacadh a thoirt air falbh.
An-diugh, faodaidh grunn uidheamachd às-làimh fèin-ghluasadach a dhèanamh an àite mòran de phròtacalan làimhe, ach cha deach cus ath-bheothachadh agus / no putadh thargaidean a choileanadh a-riamh. Faodaidh bacadh a bhith fhathast a bhith an làthair anns na siorran nc sgeadachaidh glan no is dòcha gu bheil iad air buaidh a ghabhail mu thràth. Tha diofar ro-innleachdan ann gus buaidh nam bacadh a lughdachadh. Faodaidh an roghainn den polymerase iomchaidh buaidh mhòr a thoirt air gnìomhachd bacadh. Tha dòighean dearbhaidh eile a thaobh casg PCR a lughdachadh tha àrdachadh cuimseachadh polymersae leithid BSA.
Faodar casg a chuir air ath-bheachdan PCR le bhith a 'cleachdadh smachd càileachd pròiseas taobh a-staigh (IPC).
Feumar cùram a ghabhail gus a h-uile ath-choimeas agus fuasglaidhean eile anns a 'phasgan às-tharraing, Edta, Guscn, bhon searbhagan niuclasach le ceum nigheadaireachd. A rèir an dùmhlachd, faodaidh iad PCR a ghnìomhachadh no a chuir dheth.