Fuasgladh dhuilgheadasan PCR Analyzer: Ceistean Bitheanta agus Fuasglaidhean

Tha sgrùdairean ath-bhualadh slabhraidh polymerase (PCR) nan innealan riatanach ann am bith-eòlas moileciuil, a’ leigeil le luchd-rannsachaidh DNA a mheudachadh airson tagraidhean bho sgrùdadh ginteil gu breithneachadh clionaigeach. Ach, mar inneal iom-fhillte sam bith, faodaidh anailisiche PCR coinneachadh ri duilgheadasan a bheir buaidh air a choileanadh. Tha an artaigil seo a’ dèiligeadh ri cuid de cheistean cumanta mu dheidhinnMion-sgrùdaire PCRfuasgladh cheistean agus a’ toirt seachad fuasglaidhean practaigeach air duilgheadasan cumanta.

1. Carson nach eil mo fhreagairt PCR ag àrdachadh?

Is e aon de na duilgheadasan as cumanta a tha mu choinneamh luchd-cleachdaidh neo-chomas freagairt PCR an DNA targaid àrdachadh. Faodaidh seo a bhith air a chomharrachadh le grunn nithean:

Dealbhadh primer ceàrr: Dèan cinnteach gu bheil na primers agad sònraichte airson an t-sreath targaid agus gu bheil an teòthachd leaghaidh as fheàrr (Tm). Cleachd innealan bathar-bog airson dealbhadh primer gus ceangal neo-shònraichte a sheachnadh.

DNA Teamplaid gu leòr: Dèan cinnteach gu bheil thu a 'cleachdadh tomhas gu leòr de DNA teamplaid. Bidh ro bheag mar thoradh air leudachadh lag no gun leudachadh.

Luchd-bacadh san sampall: Faodaidh truaillearan san sampall bacadh a chuir air freagairt PCR. Beachdaich air do DNA a ghlanadh no cleachdadh dòigh às-tharraing eile.

Fuasgladh: Thoir sùil air an dealbhadh primer agad, àrdaich dùmhlachd teamplaid, agus dèan cinnteach nach eil bacadh anns an sampall agad.

2. Carson a tha an toradh PCR agam am meud ceàrr?

Mura h-eil meud an toraidh PCR agad mar a bhiodh dùil, is dòcha gu bheil e a’ nochdadh duilgheadas leis na cumhaichean freagairt no na grìtheidean a thathas a ’cleachdadh.

Meudachadh neo-shònraichte: Faodaidh seo tachairt ma cheanglas primer ri làrach gun dùil. Thoir sùil air sònrachas nan primers a’ cleachdadh inneal leithid BLAST.

Teòthachd annealing ceàrr: Ma tha an teòthachd annealing ro ìosal, dh’ fhaodadh ceangal neo-shònraichte a thighinn gu buil. Optimization de theodhachd annealing a rèir caisead PCR.

Fuasgladh: Dearbhaich sònrachas primer agus an teòthachd analachaidh as fheàrr gus cruinneas thoraidhean PCR a leasachadh.

3. Bidh an anailisiche PCR agam a’ taisbeanadh teachdaireachd-mearachd. Dè bu chòir dhomh a dhèanamh?

Faodaidh teachdaireachdan mearachd air anailisiche PCR a bhith eagallach, ach gu tric faodaidh iad sanasan a thoirt seachad mu dhuilgheadasan a dh’ fhaodadh a bhith ann.

Cùisean Calibration: Dèan cinnteach gu bheil an anailisiche PCR air a calibratadh gu ceart. Tha sgrùdaidhean cumail suas agus calibration cunbhalach deatamach gus toraidhean ceart fhaighinn.

Buidheann Bathar-bog: Uaireannan, faodaidh bugaichean bathar-bog duilgheadasan adhbhrachadh. Ath-thòisich do choimpiutair agus thoir sùil airson ùrachaidhean bathar-bog.

SOLUTION: Thoir sùil air leabhar-làimhe an neach-cleachdaidh airson a’ chòd mearachd sònraichte agus lean na ceumannan fuasglaidh trioblaid a thathar a’ moladh. Faodaidh cumail suas cunbhalach casg a chuir air mòran dhuilgheadasan.

4. Carson a tha na toraidhean freagairt PCR agam neo-chunbhalach?

Faodaidh toraidhean PCR neo-chunbhalach a bhith sàrachail airson grunn adhbharan:

Càileachd an ath-ghnìomhaiche: Dèan cinnteach gu bheil gach ath-bheachdan, a’ toirt a-steach enzyman, bufairean, agus dNTPn, ùr agus de chàileachd àrd. Faodaidh ath-bheachdan a tha air tighinn gu crìch no truaillidh atharrachadh adhbhrachadh.

Calibration Cycler Teirmeach: Dh’ fhaodadh suidheachaidhean teothachd neo-chunbhalach buaidh a thoirt air pròiseas PCR. Thoir sùil gu cunbhalach air calibration an cearcall teirmeach.

Fuasgladh: Cleachd ath-bheachdan àrd-inbhe agus calibrate do chearcall teirmeach gu cunbhalach gus dèanamh cinnteach à toraidhean cunbhalach.

5. Ciamar a leasachadh PCR reaction èifeachdas?

Faodaidh leasachadh èifeachdas ath-bheachdan PCR leantainn gu toradh nas àirde agus toraidhean nas earbsaiche.

Dèan an ìre as fheàrr de shuidheachaidhean freagairt: Dèan deuchainn le bhith a’ cleachdadh diofar cho-chruinneachaidhean de primers, teamplaid DNA agus MgCl2. Is dòcha gu feum gach freagairt PCR suidheachaidhean sònraichte airson an coileanadh as fheàrr.

Cleachd enzyman àrd-dhìlseachd: Ma tha cruinneas deatamach, smaoinich air a bhith a’ cleachdadh DNA polymerase àrd-dhìlseachd gus mearachdan a lughdachadh aig àm leudachaidh.

Fuasgladh: Dèan deuchainn optimization gus na suidheachaidhean as fheàrr a lorg airson an suidheachadh PCR sònraichte agad.

Ann an geàrr-chunntas

Fuasgladh dhuilgheadasan aMion-sgrùdaire PCRfaodaidh e a bhith na obair eagallach, ach faodaidh tuigse fhaighinn air duilgheadasan cumanta agus na fuasglaidhean aca cur gu mòr ris an eòlas PCR agad. Le bhith a’ fuasgladh nan duilgheadasan cumanta sin, faodaidh luchd-rannsachaidh toraidhean PCR a leasachadh agus dèanamh cinnteach à toraidhean earbsach ann an tagraidhean bith-eòlas moileciuil. Tha cumail suas cunbhalach, taghadh faiceallach de dh’ ath-bheachdan, agus optimachadh shuidheachaidhean freagairt nam prìomh fheartan airson mion-sgrùdadh soirbheachail PCR.