Fuasgladh dhuilgheadasan anailisiche PCR: Ceistean agus fuasglaidhean a thèid fhaighneachd gu tric

Tha innealan-anailis ath-bhualadh slabhraidh polymerase (PCR) nan innealan riatanach ann am bith-eòlas moileciuil, a’ leigeil le luchd-rannsachaidh DNA a mheudachadh airson tagraidhean bho rannsachadh ginteil gu breithneachadh clionaigeach. Ach, mar inneal iom-fhillte sam bith, faodaidh duilgheadasan a bhith aig inneal-anailis PCR a bheir buaidh air a choileanadh. Tha an artaigil seo a’ dèiligeadh ri cuid de cheistean cumanta mu dheidhinnAnailisiche PCRfuasgladh dhuilgheadasan agus a’ toirt seachad fuasglaidhean practaigeach do dhuilgheadasan cumanta.

1. Carson nach eil an ath-bhualadh PCR agam ag iomadachadh?

Is e aon de na duilgheadasan as cumanta a bhios aig luchd-cleachdaidh nach urrainn don ath-bhualadh PCR an DNA targaid a mheudachadh. Faodar seo a chur às leth grunn nithean:

Dealbhadh mì-cheart prìmear: Dèan cinnteach gu bheil na prìmear ​​agad sònraichte airson an t-sreath targaid agus gu bheil teòthachd leaghaidh (Tm) as fheàrr aca. Cleachd innealan bathar-bog airson dealbhadh prìmear ​​gus ceangal neo-shònraichte a sheachnadh.

Neo-iomchaidh DNA Teamplaid: Dearbhaich gu bheil thu a’ cleachdadh meud gu leòr de DNA teamplaid. Ma tha ro bheag ann, bidh sin a’ leantainn gu lagachadh no gun leudachadh idir.

Luchd-bacadh anns an sampall: Faodaidh truailleadh anns an sampall bacadh a chur air ath-bhualadh PCR. Smaoinich air do DNA a ghlanadh no dòigh às-tharraing eadar-dhealaichte a chleachdadh.

Fuasgladh: Thoir sùil air dealbhadh do phrìmeir, àrdaich dùmhlachd an teamplaid, agus dèan cinnteach nach eil luchd-bacadh anns an sampall agad.

2. Carson a tha an toradh PCR agam den mheud ceàrr?

Mura h-eil meud toraidh PCR agad mar a bha dùil, dh’fhaodadh e a bhith a’ nochdadh gu bheil duilgheadas ann leis na suidheachaidhean ath-bhualadh no na grìtheidean a chaidh a chleachdadh.

Leudachadh neo-shònraichte: Faodaidh seo tachairt ma cheanglas prìmear ​​ri làrach ris nach robh dùil. Thoir sùil air sònrachas nam prìmear ​​le bhith a’ cleachdadh inneal leithid BLAST.

Teòthachd Annealing ceàrr: Ma tha an teòthachd annealing ro ìosal, dh’ fhaodadh ceangal neo-shònraichte tachairt. Leasachadh teòthachd annealing le PCR caisead.

Fuasgladh: Dearbhaich sònrachas a’ phrìmeir agus dèan an teòthachd annealing as fheàrr gus cruinneas thoraidhean PCR a leasachadh.

3. Tha teachdaireachd mearachd air a thaisbeanadh air an inneal-anailis PCR agam. Dè bu chòir dhomh a dhèanamh?

Faodaidh teachdaireachdan mearachd air inneal-anailis PCR a bhith eagallach, ach gu tric faodaidh iad comharran a thoirt seachad air duilgheadasan a dh’ fhaodadh a bhith ann.

Cùisean Calabrachaidh: Dèan cinnteach gu bheil an inneal-anailis PCR air a chalabrachadh gu ceart. Tha cumail suas cunbhalach agus sgrùdaidhean calabrachaidh deatamach gus toraidhean ceart fhaighinn.

Buidheann Bathar-bog: Aig amannan, faodaidh biastagan bathar-bog duilgheadasan adhbhrachadh. Ath-thòisich do choimpiutair agus thoir sùil airson ùrachaidhean bathar-bog.

FUASGLADH: Thoir sùil air leabhar-làimhe an neach-cleachdaidh airson a’ chòd mearachd sònraichte agus lean na ceumannan fuasgladh-cheistean a thathar a’ moladh. Faodaidh cumail suas cunbhalach casg a chuir air mòran dhuilgheadasan.

4. Carson a tha toraidhean mo fhreagairt PCR neo-chunbhalach?

Faodaidh toraidhean PCR neo-chunbhalach a bhith duilich airson grunn adhbharan:

Càileachd Ath-ghnìomhaichean: Dèan cinnteach gu bheil na h-ath-ghnìomhaichean uile, a’ gabhail a-steach einnseanan, bufairean, agus dNTPan, ùr agus de chàileachd àrd. Dh’fhaodadh ath-ghnìomhaichean a tha air tighinn gu crìch no air an truailleadh atharrachadh adhbhrachadh.

Calabrachadh an inneil-chuairteachaidh teirmeach: Dh’fhaodadh roghainnean teòthachd neo-chunbhalach buaidh a thoirt air a’ phròiseas PCR. Thoir sùil cunbhalach air calabrachadh an inneil-chuairteachaidh teirmeach.

Fuasgladh: Cleachd ath-bheachdan àrd-inbhe agus calibraich an rothaichear teirmeach agad gu cunbhalach gus dèanamh cinnteach à toraidhean cunbhalach.

5. Ciamar a leasaicheas tu èifeachdas ath-bhualadh PCR?

Faodaidh leasachadh èifeachdas ath-bheachdan PCR toradh nas àirde agus toraidhean nas earbsaiche a thoirt gu buil.

Leasaich suidheachaidhean ath-bhualadh: Dèan deuchainnean le bhith a’ cleachdadh diofar dùmhlachdan de phrìmearan, DNA teamplaid agus MgCl2. Dh’ fhaodadh gum bi feum aig gach ath-bhualadh PCR air suidheachaidhean sònraichte airson an coileanadh as fheàrr.

Cleachd einsìmean àrd-dhìlseachd: Ma tha cruinneas deatamach, smaoinich air polymerase DNA àrd-dhìlseachd a chleachdadh gus mearachdan a lughdachadh rè iomadachadh.

Fuasgladh: Dèan deuchainn leasachaidh gus na suidheachaidhean as fheàrr a lorg airson an t-suidheachadh PCR sònraichte agad.

Ann an geàrr-chunntas

Fuasgladh dhuilgheadasanAnailisiche PCRFaodaidh seo a bhith na obair mhòr, ach faodaidh tuigse fhaighinn air duilgheadasan cumanta agus na fuasglaidhean aca do dh’eòlas PCR a leasachadh gu mòr. Le bhith a’ fuasgladh nan duilgheadasan cumanta seo, faodaidh luchd-rannsachaidh toraidhean PCR a leasachadh agus dèanamh cinnteach à toraidhean earbsach ann an tagraidhean bith-eòlas moileciuil. Tha cumail suas cunbhalach, taghadh faiceallach de riochdairean, agus leasachadh suidheachaidhean ath-bhualadh nan iuchair airson mion-sgrùdadh PCR soirbheachail.