Duilgheadasan mion-sgrùdaidh PCRNze: Ceistean is Fuasglaidhean is Fuasglaidhean

Tha an luchd-sgrùdaidh ath-aithris Polymerose (PCR) nan innealan riatanach ann am Bith-eòlas moileciùd, leigeil le luchd-rannsachaidh a bhith a 'cur air dòigh DNA airson tagraidhean bho Diagnostics clionaigeach. Ach, mar inneal iom-fhillte, faodaidh mion-sgrùdadh PCR a bhith a 'tighinn tro dhuilgheadasan a bheir buaidh air a choileanadh. Tha an artaigil seo a 'dèiligeadh ri ceistean cumanta mu dheidhinnMion-sgrùdadh PCRA 'cur-seachad agus a' toirt seachad fuasglaidhean practaigeach do dhuilgheadasan cumanta.

1. Carson a tha an ath-bhualadh PCR agam gun a bhith a 'promplifting?

Is e aon de na duilgheadasan as cumanta a tha mu choinneimh luchd-cleachdaidh neo-chomas freagairt a 'PCR gus an DNA targaid a mheudachadh. Faodar seo a thoirt air grunn fheartan:

Dealbhadh Primer ceàrr: Dèan cinnteach gu bheil do phrìosan sònraichte airson an t-sreath targaid agus gu bheil teothachd leaghaidh as fheàrr agad (TM). Cleachd innealan bathar-bog airson dealbhadh primers gus ceangal sam bith a sheachnadh ceangail nonsipeculic.

Gu leòr teamplaid DNA: Dearbhaich gu bheil thu a 'cleachdadh tòrr de theamplaid DNA. Bidh ro bheag a 'leantainn gu lag no gun a bhith a' leudachadh.

DÙTHCHASAN Anns an sampall: Faodaidh truaillearan san amharc casg a chuir air ath-bhualadh PCR. Beachdaich air do DNA no a 'cleachdadh modh tarraingeachd eadar-dhealaichte.

Fuasgladh: Thoir sùil air an dealbhadh as fheàrr leat, dùmhlachd teamplaid, agus dèan cinnteach nach bi bacadh ann an sampall agad.

2. Carson a tha mo PCR a 'toirt a-steach am meud ceàrr?

Mura h-eil meud an toraidh PCR agad mar a bha dùil, faodaidh e duilgheadas a nochdadh le cumhaichean ath-bhualadh no tàthchuid.

Leudachadh neo-shònraichte: Faodaidh seo tachairt ma tha primer a 'ceangal ri làrach gun dùil. Thoir sùil air sònrachadh nam prìosan a 'cleachdadh inneal leithid spreadhadh.

Teòdhachd a-steach a-steach do theòthachd: Ma tha an teòthachd bhealaich ro ìosal, dh 'fhaodadh gun tèid ceangaladh ro ìosal. Optimization de theòthachd bhuidhneanachd le grafient PCR.

Fuasgladh: Dearbhaich sònrachas primer agus intimize teòthachd a 'àbhaisteach a leasachadh gus cruinneas stuthan PCR a leasachadh.

3. Tha an mion-sgrùdadh PCR agam a 'taisbeanadh teachdaireachd mearachd. Dè bu chòir dhomh a dhèanamh?

Faodaidh teachdaireachdan mearachd air mion-sgrùdadh PCR a bhith ag àrè-rabhaidh, ach faodaidh iad boillsgidhean a thoirt do dhuilgheadasan gu tric.

Cùisean Calioradair: Dèan cinnteach gu bheil an mion-sgrùdadh PCR a 'calibrated gu ceart. Tha sgrùdaidhean cumail suas agus calibration cunbhalach deatamach gus toraidhean ceart fhaighinn.

Buidheann bathar-bog: Aig amannan, faodaidh biastagan bathar-bog duilgheadasan adhbhrachadh. Ath-thòiseachadh do choimpiutair agus thoir sùil airson ùrachaidhean bathar-bog.

Fuasgladh: Thoir sùil air leabhar-làimhe an neach-cleachdaidh airson a 'chòd mearachd sònraichte agus lean na ceumannan trioblaideach a thathar a' moladh. Faodaidh cumail suas cunbhalach casg a chuir air mòran dhuilgheadasan.

4. CARSON A THA A 'GABHAIL A-STEACH PPR MOLAIDHEAN PPR neo-chunbhalach?

Faodaidh toraidhean PCR neo-chunbhalach a bhith duilich airson grunn adhbharan:

Càileachd ath-thòiseachadh: Dèan cinnteach gu bheil a h-uile ath-ghluasad, a 'toirt a-steach enzymes, bufairean, agus dtps, ùr agus de chàileachd àrd. Faodaidh tagachaidhean a dh 'fhalbh no truaillte caochlaideach adhbhrachadh.

Calibration Cycller Termal: Faodaidh roghainnean teòthachd neo-chunbhalach buaidh a thoirt air pròiseas PCR. Thoir sùil air gu cunbhalach air calibration an cycler teirmeach.

Fuasgladh: Cleachd mìneachadh àrd-inbhe agus calibrate do chead teirmeach gu cunbhalach gus dèanamh cinnteach gu bheil toraidhean cunbhalach ann.

5. Mar a leasaicheas tu èifeachdas ath-bhualadh PCR?

Faodaidh leasachadh èifeachdas ath-bhualaidhean PCR a bhith a 'leantainn gu toradh nas àirde agus toraidhean nas earbsaiche.

A 'GABHAIL A' GABHAIL A 'GABHAIL A-STEACH: Deuchainn a' cleachdadh diofar chòmhraidhean de phrìosanairean, teamplaid DNA agus MGCL2. Is dòcha gum feum gach ath-bhualadh pcr cumhachan sònraichte airson coileanadh as fheàrr.

Cleachd enzymes High-Fidelity: Ma tha cruinneas deatamach, beachdaich air a bhith a 'cleachdadh cluasaid gu polymerase gus mearachdan a lughdachadh aig a' mhearachdan.

Fuasgladh: Dèan cinnteach gun lorg thu na suidheachaidhean as fheàrr agad airson do shuidheachadh PCR Sònraichte agad.

Ann an geàrr-chunntas

A 'cur dragh air aMion-sgrùdadh PCRFaodaidh a bhith na ghnìomh eagalach, ach faodaidh e a bhith a 'tuigsinn duilgheadasan cumanta agus na fuasglaidhean aca cur ris an eòlas PCR agad gu mòr. Le bhith a 'fuasgladh na duilgheadasan cumanta sin, faodaidh luchd-rannsachaidh toraidhean PCR a leasachadh agus dèanamh cinnteach gu bheil toraidhean earbsach ann an tagraidhean bith-eòlas moilecular. Cumail suas cunbhalach, taghadh cùramach de ath-leasachaidhean, agus mas e optimization cumhachan ath-bhualadh tha iuchraichean gus mion-sgrùdadh PCR soirbheachail.